解凍樣品后，在不同條件下未觀察到血小板計(jì)數(shù)的顯著差異 （然而，就平均血小板體積 （MPV） 而言，與新鮮樣品相比，在 -80 °C 下冷凍的血小板在 6 個月和 12 個月時表現(xiàn)出體積增加（分別為 p < 0.0001 和 p < 0.001）。然而，與新鮮樣品相比，在 -20 °C 下冷凍 6 個月和 12 個月的樣品顯示 MPV 降低（p <分別為 0.0001 和 p < 0.01）

      就冷凍過程中血小板活化的可能性而言，被冷凍的樣品確實(shí)顯示出比新鮮樣品更高水平的血小板活化這些差異在儲存 12 個月的所有情況下均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （p < 0.5）。關(guān)于儲存 6 個月的樣品，盡管普遍存在較高的血小板活化趨勢，但只有儲存在 -20 °C 的樣品顯示出顯著差異 （p < 0.001）。

      通過 ELISA 測量冷凍 PL 和 PRP 中的幾種血小板和血小板外來源的 GF，以確定冷凍過程是否會影響它們的釋放和/或降解。血小板衍生分子 VEGF 和 PDGF-AB 表現(xiàn)出類似的模式，其中 PRP 冷凍導(dǎo)致這些因子在所有情況下的水平降低 ，在 -80 °C 下冷凍 6 個月和 12 個月的 PRP 中，VEGF 顯著低于 PL 中 （p 分別為 0.01 和 p << 0.05）。事實(shí)上，在 -80 °C 下冷凍的樣品之間，6 （p < 0.01） 和 12 （p < 0.5） 個月的 PDGF-AB 水平也存在顯著差異。此外，PL 中的 PDGF-AB 水平顯著高于在 -20 °C 下冷凍 12 個月的 PRP （p < 0.01）。

      進(jìn)行細(xì)胞術(shù)分析以研究冷凍保存后血小板的功能 .為此，用二磷酸腺苷 （ADP） 刺激血小板，并在新鮮 PRP 以及在 -80 °C 下冷凍 6 個月和 12 個月的 PRP 中測量 P-選擇素水平。在刺激后的新鮮條件下，血小板活化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （p < 0.0001）。此外，在靜息血小板中，與新鮮條件相比，在 -80 °C 下冷凍時，6 個月和 12 個月的活化顯著更大 （p < 0.5 和 p < 0.01）。相比之下，在 -80 °C 下冷凍 6 個月和 12 個月的血小板中觀察到 ADP 活化血小板的活化率低于新鮮條件下的血小板（p <分別為 0.0001 和 p < 0.0001）。然而，在 6 個月或 12 個月時，靜息條件和刺激條件之間沒有發(fā)現(xiàn)顯著差異。

      使用掃描電子顯微鏡 （SEM） 分析 -20 和 -80 °C 下新鮮和凍存血小板的外部結(jié)構(gòu)。新鮮血小板呈球形結(jié)構(gòu)，從體內(nèi)延伸出一些小偽足，表面相當(dāng)光滑，無血小板相互作用. 關(guān)于在 -20 °C 下冷凍的血小板，觀察到表面粗糙度和血小板聚集增加 ，當(dāng)血小板在 -80 °C 下凍存時，它們的球形形態(tài)和膜的完整性喪失，并出現(xiàn)各種多孔結(jié)構(gòu)。

      結(jié)果顯示，當(dāng)比較新鮮和冷凍條件時，96 小時真皮成纖維細(xì)胞的活力和增殖沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。

      本研究支持PRP在-20°C和-80 °C 下長期冷凍保存的可行性，表明 PRP 即使在儲存 6 至 12 個月后仍能保持其關(guān)鍵特性和生物活性。盡管冷凍保存導(dǎo)致血小板大小和形態(tài)的變化以及活化水平的增加，但 PRP 的一般生物活性保持不變。盡管觀察到血小板來源的 GFs 減少，但血小板外 GFs 的水平保持穩(wěn)定，這有助于維持 PRP 的治療效果。

      即做即用的PRP制備方式能夠最大限度地減少存儲過程中的潛在風(fēng)險，如污染、變質(zhì)等，從而確保治療時所使用的PRP處于最佳狀態(tài)。此外，即做即用還能避免長時間凍存可能對PRP成分和活性產(chǎn)生的微妙影響，盡管這些影響在當(dāng)前研究中可能并未顯著表現(xiàn)出來。

      因此，在追求便捷性的同時，我們更應(yīng)堅(jiān)守安全有效的底線。即做即用的原則不僅是對患者負(fù)責(zé)的表現(xiàn)，也是推動PRP治療技術(shù)持續(xù)健康發(fā)展的關(guān)鍵所在。我們期待未來能有更多研究進(jìn)一步探索和優(yōu)化PRP的制備與存儲方法，以更好地服務(wù)于廣大患者。